首頁(yè)輕松純化His標(biāo)簽胞外分泌蛋白
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從真核細(xì)胞上清液中純化蛋白是一項(xiàng)繁瑣的工作。通常情況下胞外分泌蛋白的濃度很低，且蛋白很容易被細(xì)胞上清液中的蛋白酶降解。
當(dāng)然，Cube Biotech實(shí)驗(yàn)室也面臨同樣的問(wèn)題。然而一天，Cube Biotech的科學(xué)家想到是否我們可以把磁珠直接加入溶液，從平衡體系中分離出帶His標(biāo)簽的蛋白？通過(guò)嘗試，整個(gè)純化過(guò)程變得比以前更加容易。因此，我們開(kāi)發(fā)了一個(gè)新的方法來(lái)純化分泌在胞外的His標(biāo)簽蛋白。
當(dāng)然，新的方法能夠成功也是因?yàn)?a href="http://www.qtmmdical.com/content-17-163-1.html" style="font-family:"sans serif", tahoma, verdana, helvetica;font-size:13px;">Cube Biotech所有的親和純化磁珠：NTA，IDA，和新的INDIGO系列產(chǎn)品都可以通過(guò)高溫蒸汽滅菌鍋處理。有興趣嘗試我們新方法用于下一次表達(dá)的His標(biāo)簽胞外分泌蛋白？請(qǐng)參看我們?nèi)缦碌?b style="font-family:"sans serif", tahoma, verdana, helvetica;font-size:13px;">操作流程：
1. 拿一小瓶PureCube His標(biāo)簽親和磁珠（Ni-INDIGO、Ni-NTA、Ni-IDA）移去保護(hù)液并添加同體積PBS后用高溫蒸汽滅菌處理。
2. 在培養(yǎng)瓶中裝入細(xì)胞培養(yǎng)液并接種細(xì)胞。
3. 在培養(yǎng)瓶中加入高溫蒸汽處理過(guò)的100μl（25%含量）的磁珠到50ml培養(yǎng)液中。磁珠用量也可以通過(guò)蛋白表達(dá)量來(lái)計(jì)算。
4. 在培養(yǎng)瓶外貼上磁鐵后按照通常的方法培養(yǎng)細(xì)胞。當(dāng)帶His標(biāo)簽的蛋白分泌到上清液后將會(huì)被磁珠捕獲。
5. 需要收集蛋白時(shí)，將培養(yǎng)液取出并用清洗液清洗固定在培養(yǎng)瓶壁上的磁珠。
6. 去掉磁鐵后將磁珠轉(zhuǎn)移到一個(gè)干凈的小管內(nèi)。
7. 加入洗脫液反應(yīng)后將洗脫液轉(zhuǎn)移到另一個(gè)干凈的小管內(nèi)。
8. 洗脫液中含有純化出的帶His標(biāo)簽的目標(biāo)蛋白。
